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    如何提高ELISA的重現性?

    發布時間: 2018-11-05  點擊次數: 167次

    免疫檢測法的性表現為單次實驗孔間(批內)的重復性和多次實驗之間(批間)的重復性。CV值高則表明度低,通常由以下兩個原因造成:移液技術和洗滌技術。

     

    移液技術

    1. 移液時,槍頭應對準孔中央,避免接觸孔壁及底部。

    2. 移液后輕輕晃動混勻試劑。

    3. 如果您的樣品具有黏性,請預先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等待片刻使體積平衡后再取出。

    4. 移液不充分或移液體積不均,說明移液器需要校正。必要時請檢查移液器并重新校正。

    5. 加樣時,不同的試劑標準品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。

    6. 確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無法正確量取吸液和加樣的體積。

     

    洗滌技術

    1. 如果使用自動洗板機或多通道移液器,請確保進出口能正常運作。

    2. 后一次洗滌后,翻轉酶標板倒出多余的洗滌液,并在吸水紙上拍干液體。洗板太快或太慢都會降低度。不能讓孔內液體自然風干,需立即進行下一步操作。

    3. 按照說明書,添加足量的洗滌液至孔內,并保證洗滌完全。

    4. 由于洗滌液不是通用的,當試劑盒內的洗滌液用完時,請不要使用其他試劑盒中的洗滌液。如有需要,可聯系技術支持尋求幫助。

    5. 不要減少洗滌時的浸泡時間或跳過浸泡的步驟。

    6. 按照說明書上推薦的洗滌次數清洗,隨意改變洗滌的次數會影響實驗的性。

     

    貯液瓶

            為避免污染,不同的試劑使用不同的貯液瓶。一些試劑或樣本很容易被污染(比如唾液、氧化劑等),請參考說明書操作。必要時候采取一些預防措施保護溶液。

     

    封板覆膜

            使用過的封板覆膜可能含有上一步實驗殘留的試劑,如果重復使用會造成孔板污染,從而導致性低。建議每一次孵育使用新的封板覆膜。

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