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    上海研域教您植物組織蛋白質提取方法

    發布時間: 2018-12-05  點擊次數: 141次

    植物蛋白是蛋白質的一種,來源是從植物里提取的,營養與動物蛋白相仿,但是更易于消化。含植物蛋白豐富的是大豆。但在飲食中,植物蛋白和動物蛋白要搭配食用。他們的提取方式有兩種,如下:

    一、植物組織蛋白質提取方法

    1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。

    2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。

    3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

    4、提取上清液,樣品制備完成。

    蛋白質提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g。這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳。

    二、植物組織蛋白質提取方法( 氯醋酸—丙酮沉淀法)

    1、在液氮中研磨葉片

    2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下放置一晚,然后離心(4℃8000rpm以上1小時)棄上清。

    3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時),然后真空干燥沉淀,備用。

    4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。

    5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。藥品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。這種方法針對雙向電泳,雜質少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少。

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