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    如何選擇適合的細胞分離

    發布時間: 2019-03-08  點擊次數: 145次

        從樣品中分離提純同種試劑盒,是許多下游應用的關鍵一步,分離得到的細胞可以用于基因鑒定、大鼠小鼠ELISA試劑盒計數、生化分析、蛋白分離、宿主-病原體互作以及細胞間相互作用等研究。

        一款合適的分離試劑盒可以說是實驗成功的保障,因為只有獲得正確的ELISA試劑盒,下游的分析結果才可能準確。目前,市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇,它們的主要區別在于分離方法和篩選標志。那么,如何選擇zui適合自己的細胞分離試劑盒呢?

    正向選擇VS負向選擇

        試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩種,正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒直接結合的抗體來進行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連,可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-復合物提取出來,再通過二抗將磁珠與目標分開。負向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠,不過這種試劑盒是通過去除樣品中的非目的,來間接捕獲目的。

        這兩種細胞分離試劑盒如何取舍,主要取決于目標細胞的表面是否具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠實現特異性的捕獲,避免所獲得的細胞被非目標細胞污染。如果你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志,那么正向選擇的細胞分離試劑盒就是特別好選擇。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標志,那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。

    篩選標志的確定

        通過PubMed等數據庫中的文獻,我們一般可以確定在目標上表達的篩選標志。如果文獻中找不到適合自己的表面標志,我們還可以用目標的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結果會顯示,目標細胞上可能表達的表面標志,在此基礎上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來說,對一個T進行BLAST搜索,結果會顯示該是否表達CD4或CD8。在得知目標表達CD4之后,我們可以先對樣品進行一個免疫實驗(如ELISA),以檢驗BLAST搜索的結果。一旦證實目標的確表達CD4,我們就可以用相應試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。

    一般流程

        對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說小鼠ELISA試劑盒,操作流程主要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,使抗體與CD4+ T結合。然后洗去不需要的非目標(即不表達CD4的),留下磁珠-抗體-復合物。ELISA試劑盒將上述復合物與能結合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞,形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物,而所有的CD4+細胞留在上清中。只需將上清轉移就可以進行下游研究了。

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