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    細胞均勻鋪板技巧

    發布時間: 2019-03-29  點擊次數: 156次

    1、一般96孔板,每孔是加100微升細胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細胞懸液混一下再,繼續加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度,太強或次數太多會導致細胞集中成堆,將板順時針旋轉(逆時針效果不好),依次敲擊剩余三個邊,靜置約5分鐘,放入37度培養箱。

    6孔板12孔板或24孔板,均采用將第一個孔加入少量無血清培養基,晃動浸潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔一次類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細胞懸液會平鋪在整個孔底,加細胞懸液的時候可以避免加在中間中間細胞多,而加在周邊晃勻后周邊細胞多中間少的現象,細胞分散較均勻,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。

    2、細胞懸液加完后,將細胞培養板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細胞有沒有抱團。然后從底部敲擊,使之分散。

    3、如果實驗室有平板振蕩器的話,建議用這個儀器稍振蕩一下,效果不錯,就是振幅小,頻率高的那種。

    4、細胞要盡量打散,大部分呈單個狀態。離心后,要充分懸浮!還有轉移到六孔板后,是要晃得!晃的時候不要讓那個細胞液轉圈,不然細胞就全被帶到中間去了,就會不均勻!

    5、一瓶細胞長滿后,正常處理,在培養瓶里吹勻,然后鋪6孔板,每孔2毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放到培養箱里,輕微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小時之后觀察 每孔的細胞都會很均勻。

    6、計算好所需要的全部液體量和細胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,顯微鏡下觀察,如果不均勻,按上述方法再晃。如果細胞未計數直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時晃一下混勻用的瓶子,瓶子我通常是順時針或逆時針轉圈。

    7、放在水平板面上先上下移動,再左右移動,每個方向5到6次,但關鍵的是搖完后直接放入培養箱中,不要再做過多的運動,例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去了。

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