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    研域生物:抗體和重組蛋白的穩定性你料及多少呢?

    發布時間: 2019-06-06  點擊次數: 100次

    1. 收到抗體和重組蛋白后的操作
     
    收到抗體和重組蛋白后(大部分抗體和重組蛋白是溶液態),請必須在 4℃,12000rpm,離心 3 分鐘,再打開管蓋進行分裝、溶解和保存(假如抗體和重組蛋白體積小于 50µl,請延伸離心時刻至 5 分鐘,以保證悉數抗體和重組蛋白均離心下來,干粉狀況的相同適用)。抗體和重組蛋白運用特制的貯存管,只要在 12000rpm 離心 3 分鐘,才能將附著在管壁或蓋內的抗體和重組蛋白悉數離心下來(即使是在 10000rpm 離心也會離心不徹底,導致出現抗體和重組蛋白的量缺乏的現象)。請具體閱覽說明書,并依照引薦的保存條件正保證存和運用抗體和重組蛋白。
     
    2. 抗體和重組蛋白的長時刻保存
     
    關于大部分抗體和重組蛋白,比較合適的保存辦法是:抗體分裝后保存在-20℃,重組蛋白分裝后保存在-80℃。
     
    (1)分裝可以da程度的降低重復凍融對抗體和重組蛋白活性的危害,同時也降低了由于屢次從同一管中吸取抗體和重組蛋白形成的污染可能性。
     
    (2)分裝的量以一次試驗用完為好,少不能少于 10µl 每份。由于分裝體積越小,抗體和重組蛋白的濃度越可能會受到蒸騰以及管壁吸附的影響。
     
    (3)復融后的分裝抗體和重組蛋白假如一次用不完,將剩余母液保存在 4℃,防止再凍起來。
     
    (4)抗體和重組蛋白工作液應該當天配制當天用完,4℃ 保存盡量不要超過 1 天。
     
    (5)防止將抗體和重組蛋白保存在自動除霜冰箱中,將抗體和重組蛋白保存在冰箱里層,防止溫度變化形成重復凍融。
     
    3. 抗體和重組蛋白的短期保存
     
    大部分 的抗體和重組蛋白收到后 4℃ 時刻短保存 1~2 周,對抗體和重組蛋白活性沒有影響。假如抗體和重組蛋白很快會運用(1~2 周內),引薦在 4℃ 保存,這是為了防止重復凍融對抗體和重組蛋白活性的危害。關鍵的一點是要根據說明書引薦的辦法來正確的保存抗體和重組蛋白。
     
    4. 抗體和重組蛋白的運送條件
     
    一般的運送進程需要 1~2 周的時刻,所以是在低溫 4℃ 的條件下來完成的。4℃ 運送首要的意圖是為了防止重復凍融對抗體和重組蛋白活性的危害(假如運用干冰運送,那么收到時抗體和重組蛋白是凍起來的,為了分裝就需要凍結,這就多了一次凍融的進程),所以運送進程中一般防止干冰運送。
     
    5. 抗體和重組蛋白的穩定性
     
    (1)抗體的穩定性是自然界長時刻進化的結果,抗體是免疫系統中重要的分子之一,其穩定性是自然進化挑選的結果,在很多物種中,抗體分子形成了保守而穩定的結構。
     
    (2)抗體的高Tm值,在室溫下,乃至短時刻溫度到達 50~60℃,抗體分子都能保持正確折疊,堅持其應有的活性。
     
    (3)抗體和重組蛋白的純度。選用先進的抗體和重組蛋白純化技能,保證抗體和重組蛋白產品的高純度,保證其抗體和重組蛋白產品的穩定性。
     
    (4)抗體和重組蛋白的濃度。高濃度的抗體和重組蛋白產品可削減容器表面吸附形成的物質損失,高濃度的抗體和重組蛋白穩定性更好。大部分抗體和重組蛋白濃度為 1 mg/ml,抗體和重組蛋白純度高,特異性好,效價更高。 
     
    6. 重組蛋白的特性
     
    重組蛋白分為凍干粉和溶液態兩種保存方式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀況,真核細胞表達的重組蛋白為溶液態保存,這樣使得重組蛋白非常穩定,在-80℃ 條件下可保存數年。凍干粉在運用前需進行溶解,其間溶解的辦法非常關鍵,由于溶解不好會降低蛋白的功效。溶液態保存的重組蛋白在凍融稀釋運用進程中也需要細心注意,這些都是用戶在實踐運用中常常遇到的問題。
     
    (1)原核細胞表達的重組蛋白。大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,現已從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,運用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白 100 µg,用 86µl 的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可徹底溶解,必定不能運用渦旋儀進行快速振動或劇烈搖晃。
     
    (2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質不僅要轉錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質的空間折疊辦法保持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞可以識別和去除基因中的內含子,對翻譯后的蛋白質進行加工,這樣表達的蛋白質具有生物活性。咱們用溶液態來保存,堅持了其良好的活性和穩定性。
     
    (3)重組蛋白的保護劑。在凍干和貯存進程中常用的保護劑或穩定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。咱們一般加 8%(質量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻撓蛋白質二級結構改動以及凍干進程中蛋白質的擴展和集合,甘露醇也是一種遍及運用的凍干保護劑和填充劑。

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