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    大鼠仙臺病毒(HVJ)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

    發布時間: 2018/6/22  點擊次數: 145次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
    圖片類型: 下載次數: 2
    資料類型: DOC 瀏覽次數: 145
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    本試劑盒僅供研究使用。
    96T

    大鼠仙臺病毒(HVJ)酶聯免疫分析試劑盒使用目的:
    本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中仙臺病毒(HVJ)表達。
    實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠仙臺病毒(HVJ)表達。用純化的大鼠仙臺病毒(HVJ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中仙臺病毒(HVJ)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的仙臺病毒(HVJ)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠仙臺病毒(HVJ)的存在與否。
    試劑盒組成 

    標本要求 
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    大鼠仙臺病毒(HVJ)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟
    1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)


    2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
    7.溫育:操作同3。
    8.洗滌:操作同5。
    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
    10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。


    操作程序總結:


    計算和結果判定:
      試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
      臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
      陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為仙臺病毒(HVJ)陰性
      陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為仙臺病毒(HVJ)陽性
    。 
    注意事項
    1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
    2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物請避光保存。
    6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
    大鼠仙臺病毒(HVJ)酶聯免疫分析試劑盒保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月

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