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    人NAD/NADH酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

    發布時間: 2018/12/20  點擊次數: 120次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
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    人NAD/NADH酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

    檢測范圍:96T

    0.8U/L –30U/L

    人NAD/NADH酶聯免疫分析試劑盒使用說明書使用目的:

    本試劑盒用于測定人培養細胞及相關液體樣本中NAD/NADH含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人NAD/NADH水平。用純化的人NAD/NADH抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入NAD/NADH,再與HRP標記的NAD/NADH抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的NAD/NADH呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人NAD/NADH濃度。

    試劑盒組成

    標本要求 

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    人NAD/NADH酶聯免疫分析試劑盒使用說明書操作步驟

    標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    溫育:操作同3。
    洗滌:操作同5。
    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    人NAD/NADH酶聯免疫分析試劑盒使用說明書操作程序總結:

    計算

      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

    注意事項

    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個月

     

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