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    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯免疫分析

    發布時間: 2019/4/25  點擊次數: 83次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
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    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯免疫分析試劑盒運用說明書
    本試劑盒僅供研究運用。
    檢測規模:  96T 12 U/L -550 U/L

    運用意圖:本試劑盒用于測定斑馬魚血清、血漿及相關液體樣本中酰基輔酶A(Acyl-Coa)活性。
    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯免疫分析試劑盒試驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)水平。用純化的斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中順次參加酰基輔酶A(Acyl-Coa),再與HRP標記的酰基輔酶A(Acyl-Coa)抗體結合,構成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終究的黃色。顏色的深淺和樣品中的酰基輔酶A(Acyl-Coa)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),經過規范曲線核算樣品中斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)活性濃度。 

    試劑盒組成 

    標本要求 
    1.標本收集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行試驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3按捺辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟



    2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、規范孔、待測樣品孔。在酶標包被板上規范品精確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終究稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    4.配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5.洗刷:當心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    6.加酶:每孔參加酶標試劑50μl,空白孔除外。 
    7.溫育:操作同3。
    8.洗刷:操作同5。
    9.顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色10分鐘.
    10.停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉黃色)。
    11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加停止液后15分鐘以內進行。
    斑馬魚酰基輔酶A(Acyl-Coa)酶聯免疫分析試劑盒操作程序總結:


    核算
      以規范物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出規范曲線,根據樣品的OD值由規范曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用規范物的濃度與OD值核算出規范曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,核算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實踐濃度。 
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗刷液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗刷時不影響成果。
    3.各步加樣均應運用加樣器,并常常校正其精確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,引薦運用排槍加樣。
    4.請每次測定的一起做規范曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于規范品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,核算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性運用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格依照說明書的操作進行,試驗成果判定有必要以酶標儀讀數為準.
    8.所有樣品,洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月
     

     

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