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    山羊布魯氏菌病酶聯免疫分析(ELISA)

    發布時間: 2019/5/31  點擊次數: 69次
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    山羊布魯氏菌病(Brucellosis)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒

    本試劑盒僅供研究使用。

    使用目的:本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關液體樣本中布魯氏菌病(Brucellosis)的含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用間接法測定標本中山羊布魯氏菌病(Brucellosis)水平。用純化的山羊布魯氏菌病(Brucellosis)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的布魯氏菌病(Brucellosis)標準品和未知濃度的布魯氏菌病(Brucellosis)待檢樣品,溫育后,加入生物素標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的布魯氏菌病(Brucellosis)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中山羊布魯氏菌病(Brucellosis)濃度。

    山羊布魯氏菌病(Brucellosis)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒試劑盒組成 

    標本要求 

    1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    山羊布魯氏菌病(Brucellosis)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒操作步驟

    根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
    加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應孔中加入50微升樣本,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
    配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。
    加生物素標記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
    洗滌:操作同4。
    加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    洗滌:操作同4。
    顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    計算

      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

    山羊布魯氏菌病(Brucellosis)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒注意事項

    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以稀釋倍數(×5×n)。
    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    線性范圍:

    6.0pg/ml-160pg/ml

    規格:

    96人份/盒

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個月

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